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什么是常规PCR?
PCR即聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction)的缩写,1983年出现的一种对已知DNA片段进行体外扩增的技术。它利用耐高温的DNA聚合酶(Taq 酶),将模板DNA,引物,脱氧核苷三磷酸(dNTP)和缓冲液等在不同温度间循环,从而达到双链DNA分离,引物粘合到模板上的互补区间,最后在DNA聚合酶作用下脱氧核苷三磷酸逐个添加到新合成的DNA链上的过程。通过PCR技术,特定DNA片段可以达到指数级别的扩增,从原来的少量DNA分子扩增到可以用仪器检测的水平,利用这一特点可以对一些特异的病原或疾病标志物进行诊断。

近几年,由于PCR技术的不断成熟,特别是实时荧光定量PCR(qPCR)的出现,使得基于qPCR的分子诊断产品日渐成为主流。但常规的PCR技术由于热循环的需要,使这一技术完全依赖于电源和昂贵的PCR仪器,从而限制了这一技术在实验室之外的应用。由于这些缺点,科学界一直在试图发展不需要使用PCR仪器的核酸扩增方法,恒温核酸扩增技术的发展成为一个不可逆转的趋势。

主要的步骤:
★DNA变性 加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。
★引物与靶DNA退火 适当降低温度,使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。
★引物延伸 在DNA聚合酶的催化下,引物沿着靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA链在变性解离后,又可作为模板与引物杂交,并且在DNA聚合酶的催化下,引导合成新的靶DNA链。如此反复进行以上3个步骤,即可使靶DNA片段指数性扩增。